序
SOD的中文名字叫超氧化物歧化酶，英文名字叫超氧化物歧化酶。其分子量(牛紅細胞)約為32000，是壹種廣泛存在於生物體內的金屬蛋白酶。它的別名有:orgotein、ormetein、ontosein；以立方計量的鋅超氧化物歧化酶；Palosein等人，SOD被科學家譽為21世紀最有前途的藥用酶。
1.這個過程是壹種從紅細胞、肝臟和其他哺乳動物組織中分離出來的金屬酶；它包含兩個亞單位，每個亞單位包含壹個銅原子和壹個鋅原子。超氧化物歧化酶可以催化氧氣歧化成H2O和氧氣。它的性質不僅取決於酶蛋白，還取決於活性部位的金屬離子。根據金屬離子的種類，可以分為三種:Cu。鋅超氧化物歧化酶和鐵超氧化物歧化酶，錳超氧化物歧化酶。壹般情況下，SOD相對穩定。以立方計量的不同來源的鋅。紫外吸收光譜略有不同。例如，牛血SOD在258nm處顯示最大吸收，而豬血SOD在265nm處顯示最大吸收峰。在壹定條件下，酶的活性會降低，甚至完全喪失。比如氰化物能抑制SOD活性，過氧化氫能降低SOD活性，氯化胍能明顯抑制SOD活性。
二、SOD的使用主要是基於SOD是超氧陰離子的清除劑，而超氧陰離子(O2~)是人體內的有毒物質，可引起多種疾病，因此可以清除炎癥過程中產生的超氧離子，表現出很強的抗炎作用。
在制藥工業中，SOD可以治療由超氧離子引起的各種疾病，如糖尿病、白內障、類風濕性關節炎等。也是有效的消炎藥，還能抗衰老、抗腫瘤、抗輻射、自身免疫性疾病。現代研究表明，SOD還可以治療高血壓、冠心病、膽囊炎、肺氣腫等難治性疾病。日化行業:由於SOD具有防止細胞老化和解毒的作用，因此，在化妝品、護膚劑等工業產品中，添加SOD具有防曬、祛斑、軟化皮膚的作用。是目前化妝品行業不可或缺的添加劑，國內外已出現大量產品。食品工業:在食品添加劑中加入SOD後，可以增強營養，緩解毒性，延長體內細胞的壽命。國內已經有SOD營養液產品，並通過了上海科研單位相關專家的鑒定。
三、SOD的發展前景:目前國內只有少數科研單位和生化制藥廠研發該產品，但使用SOD產品的廠家越來越多，遠遠不能滿足市場需求。國家為鼓勵和大力開發新的草皮產品，將其列入重點科技開發項目，投入大量資金，取得了成功，並開始向企業生產轉移，市場前景十分廣闊。
註意事項:(1)我中心熱忱歡迎各界朋友現場學習，生化工程師手把手教妳，讓妳通過現場操作、指導、培訓，盡快掌握這項技術。(2)未經本公司同意，不得將本工藝和技術資料轉讓、復制或出售給任何單位或個人，違者依法追究責任。
新精煉技術
1.主要設備:(1)壹臺工業離心機；(2)恒溫水浴鍋(10L-50L)(自制)1套；(3) 1臺冰櫃；(4) 1個混頻器；(5)玻璃器皿:1000ml，500ml燒杯，2個50ml燒杯，50ml和500ml量杯，各1；(6)幾個塑料桶。
主要試劑:(工業純度)檸檬酸鈉、檸檬酸、葡萄糖、90%乙醇、氯仿、丙酮、氯化鈉、磷酸氫二鈉、磷酸二氫鈉、去離子水或蒸餾水、葡萄糖凝膠sephadex G-100、DEAE -纖維素。
三、試劑的制備:
1.抗凝配方:(1)檸檬酸鈉30g，檸檬酸25g 10g葡萄糖加水至1l。壹般每7毫升血加1毫升(抗凝劑)。(2)40g/ l檸檬酸鈉溶液:1l。
2.生理鹽水:(0.9%)在91克水中加入0.9克氯化鈉。
3.磷酸鹽緩沖液的配制:PH7.6的0.2M磷酸鹽緩沖液壹般與Na2HPO4混合。H2O，35.61g/L和nah 2 po 4·2h2o 31.21g/L，前者加87.0ml，後者加13.0ml，若K2HPO4.3H2O為45.644g/ L，nah 2 po 4·2h2o為31.21g/L，仍為前者的87.0ml
4.冷卻液:此過程中使用-15度的低溫。壹般用以下公式:33克鹽加100克雪或碎冰，混合物可達-21.3度。
四、工藝流程
(壹)除血紅蛋白外
1.血液抗凝處理:在牛、馬、豬的新鮮血液中快速加入ACD1抗凝劑，緩慢混勻，每7毫升血液中加入1毫升或2號抗凝劑。
2.將抗凝後的血液放入離心機，3000r/min離心約15-20分鐘，用吸管小心吸出上清液(黃色血清)後扔掉。用2-3倍的生理鹽水洗滌下層紅細胞2-3次，每次洗滌以3000r/min離心7-3次。
3.在洗凈的紅細胞中加入等體積的去離子水，劇烈攪拌30分鐘，使紅細胞的細胞壁被切碎，使其中的SOD浸出。最好在0-4度靜置過夜，然後有機提取溶血。
4.然後向溶血物中緩慢加入0.2-0.25倍預冷(-15度)的95%乙醇和0.1-0.15倍預冷的氯仿，攪拌10-15分鐘，原溶血物將呈糊狀。然後以2500轉/分鐘的速度將濾液離心約65438±0-5分鐘，並留下上清液以丟棄沈澱物。此時，如果上清液略帶黃色，可以用快速濾紙過濾，得到澄清透明、顏色偏藍的粗酶液。
(2)粗酶液的初步純化:
1.丙酮醇提:向酶液中加入0.8倍預冷(-65438±05℃)的丙酮，生成大量白色沈澱，3000r/min離心2分鐘，收集沈澱，上清液可不經吸收直接倒出。
2.熱變性:(去蛋白)準備恒溫浴鍋。在這個過程中，提前30分鐘加滿水，打開電源，加熱到55-60度，節省時間。加入約50倍沈澱量的0.2MPH=7.6的磷酸鈉緩沖溶液，水浴加熱至60度，65，438+05分鐘後迅速冷卻至室溫。30000.000000000005
3.初步純化SOD:在上述沈澱物中加入去離子水，制成濃度為20-30%的SOD溶液，裝入樣品瓶中，放入冷凍幹燥機中，開機後真空度為0.2-0.1托，約1.5-2小時，得到化妝品或食品用SOD。該產品的比活大於3000 U/。
(SOD的進壹步純化:
SOD產品壹般用柱層析法處理。經過柱層析，SOD沒有小分子等雜質，層析後是高活性的SOD大分子。SOD產品價格較高，主要用作生化試劑和實驗室標準試劑。目前SOD柱層析有兩種，可以單獨使用，也可以組合使用。壹般使用DEAE -纖維素層析和sephadecxg-100 sephadex凝膠層析，(2)將熱變性的SOD丙酮沈澱溶解在PH7.6和0.2MNaH2PO4-NaHPO4的緩沖液中，當有不溶性雜質時，離心除去沈澱。將上清液過DEAE -纖維素或sephadsxg-100層析柱(1×20cm或2.5×30cm)，梯度洗脫，洗脫液為PH7.6，0.2M，NaH2PO4 - NaHPO4緩沖液，下流速控制在0.2-0.5ml/min，洗脫速率控制在0.5ml/min。
動詞 （verb的縮寫）註意事項:
1.把握合適的溫度和時間:雖然SOD對熱穩定，但在分離純化過程中最好使用較低的溫度，壹般為0-10度，時間不要超過3天。
2.註意提取純化方法:使用有機溶劑或加熱都能有效沈澱蛋白質，但掌握合適的溶劑和加熱的組合才能達到最佳效果。
6.超氧化物歧化酶的檢測方法:活性試驗。使用鄰苯三酚自氧化法是方便的。首先測定鄰苯三酚的自氧化速率，然後加入SOD，測定加入SOD後的氧化速率。根據酶活性單位的定義，即在最佳條件下，每分鐘抑制鄰苯三酚自氧化分解速率50%的酶量定義為壹個酶單位。可以依次計算總活性值，也可以通過聚丙烯酰胺凝膠電泳確定其純度。
超氧化物歧化酶是壹種重要的氧自由基清除劑。作為壹種藥用酶，引起了國內外生化界和醫學界的極大關註。SOD可以治療多種疾病，如類風濕性關節炎、心肌梗塞等。，對防輻射、抗衰老、抗腫瘤有積極作用，廣泛用於化妝品和食品添加劑。
自1969年Mccord和Fridovich首次從牛血細胞中發現超氧化物歧化酶以來，到目前為止，我國已有數十個科研單位對SOD做了大量的研究和試制工作，其中壹些已經量產。SOD引起了國內生化界的關註。1988年，首屆全國SOD學術會議在浙江寧波召開。65438年4月至0989年4月在河南開封，草皮被列為重點發展項目。90年7月在大連召開的第二屆全國SOD學術會議上，SOD作為壹種藥用酶得到了迅速發展，並將成為壹種很有前途的生化產品。
SOD是壹種廣泛存在於動物、植物和微生物中的生物酶。國外藥用SOD是從血液中提取的，我國已開發出20多個品種的SOD，證明我國SOD的研究和應用進入了壹個新時代。
在我國，從牛、馬、豬、雞、狗等動物血液中提取的SOD來源豐富，成本低廉，提取純化方便，細胞膜易破。通過常規的分離和純化方法可以獲得高純度的SOD。
該工藝采用了熱變性和超濾新技術，不僅大大簡化了工藝流程，而且與舊工藝相比，產品質量和收率大大提高，提取的SOD為CuZu-SOD。
第壹，藥物和儀器:
(1)檸檬酸三鈉:Na3C6H6O7 (2)工業丙酮CaH6O
(3)鄰苯二酚的磷酸鉀(4) K3Poe4
(5)弱堿性陰離子交換劑DEAE Sephadsxa-50外觀為40-120ubrd或DEAE-cell-ujose(DE-32)二乙基纖維素。(6)冷凍幹燥機(自組裝)
(7)折疊柱(7.5 * 30cm) (8)離心機
以上試劑及其他藥品、儀器可在各省市化學試劑商店、醫療器械商店購買。
2.銅和超氧化物歧化酶的提取和純化(以牛血和馬血為例)
1，工業過程:
用抗凝血劑洗鹽
新鮮牛血->紅血球->血紅蛋白
離心去除黃色血漿並加入NaCL
熱變性1熱變性2
紅細胞壓積->淡黃色混合液體->紅細胞壓積；
68度30分鐘60-65度20分鐘
丙酮加丙酮色譜法
淡藍色清液->絮狀沈澱->沈澱->沈澱>；
凍幹
透析脫鹽
洗脫->透析液->透析液；冷凍幹燥產品
2.萃取法
(1)采集紅細胞:新鮮牛血100升，加入3。8%檸檬酸三鈉抗凝，攪拌均勻，靜置，讓紅細胞自然沈降，除去大部分上層血漿，離心下層液體除去剩余血漿，加入3倍量0.9%氯化鈉(精制鹽)洗滌兩次，離心收集紅細胞壓積(40升)。
(2)熱變性1:向收集的紅細胞中加入4公斤氯化鈉、40克氯化銅和100升蒸餾水，攪拌均勻，水浴加熱至68度30分鐘，迅速冷卻至室溫，過濾除去沈澱，收集濾液。
(3)熱變性2:在65度恒溫水浴中向濾液中緩慢加入40g氯化銅，直至濾液變得澄清、淺藍色，保溫20分鐘，濾液迅速冷卻至室溫，離心取上清液。
(4)SOD粗品:加入總體積0.75倍的丙酮對上清液進行超濾，離心收集水中的沈澱，離心除去不溶物，得到澄清溶液，向澄清溶液中加入0.75倍體積的丙酮，離心收集沈澱，用無水丙酮洗滌脫水兩次，真空幹燥，得到淡藍色粉末狀SOD粗品。
(5)SOD粗品的純化:將SOD粗品以2.5mmol/L溶於PH值為7.6的磷酸鉀緩沖液中，混合液上樣於7.5*30cm的層柱，離子交換劑為DEAE-SphadexA-50(該柱預先用緩沖液平衡)，上樣速度為65，438+000 ~ 200ml/h，完成後使用相同的緩沖液A20。用部分收集器收集，洗脫液透析脫鹽得到濃縮透析液，冷凍幹燥得到SOD成品(淺綠色)。
三、超氧化物歧化酶活性的測定:
測定SOD的方法有很多，如化學法、免疫等電點聚焦法等。化學法的原理是某些化合物，如鄰苯三酚，在自氧化過程中會產生有色中間體來還原超氧自由基(O2)，所以可以用SOD作為例子。通過防止中間體的積累來確定酶的活性。
1，試劑和儀器
(1)鄰苯二酚為分析純，用10mmol/LECL配制成50mmol/L溶液。
(2) UV-754紫外分光光度計。
2.測定方法:
(1)鄰苯三酚自氧化速率的測定。
將10mmol/L連苯三酚加入25度、45ml′50m mol/L、PH 8.3、K2HPO4-KH2PO4的緩沖溶液中，快速搖勻，倒入光學直徑為1cm的比色皿中，在波長325mm處每隔30秒測量壹次A值，控制自氧化速度為0.0700。
(2)2)SOD或粗酶提取物的活性測定:
測定方法同鄰苯三酚自氧化法。加入鄰苯三酚前，先加入待測SOD樣品溶液，按下式計算酶活。
0.0700-325毫米/分鐘
- 100%度。
0.70
樣品稀釋倍數
酶活性(U/M1) = -反應溶液的總體積。
50%的樣本量
3、蛋白質濃度(毫克/毫升)和蛋白質計算:
SOD或粗酶提取液，經280mm紫外比色測定，查牛叫凈蛋標準曲線，計算每毫升ug蛋白量。
蛋白濃度= ug蛋白/ml *樣品溶液稀釋倍數* 10減立方= mg蛋白/ml總蛋白= mg蛋白/ml *儲備液總體積= mg蛋白。
4.比活性的計算(單位/毫克蛋白質):
每單位活性的總活性(單位/毫升)
比活性= - = u/mg蛋白質。
蛋白質濃度(毫克蛋白質/毫升)總蛋白質
四。銅和鋅超氧化物歧化酶的性質；
1，Cu和Zn-SOD為藍綠色，分子量在3200左右，由壹個Cu和壹個Zn組成。
2.對熱穩定，天然牛血SOD在75度加熱幾分鐘酶活性損失很小。
3.PH值對超氧化物歧化酶的影響。當pH在5.3 ~ 10.5範圍內時，SOD的催化速度不受影響。當pH為3.6時，95%的SODZn脫落，PH12SOD的構象不可還原，導致酶活性喪失。
4.SOD的紫外吸收特性:SOD在280 mm處無吸收峰。
5.金屬有助於酶的活性。SOD金屬酶Zn只與分子結構有關，Cu與催化活性有關。
6.SOD具有激活和失活的功能。
五、藥品和器械:
檸檬三鈉，分析純:江蘇華僑龔蓓四廠；
工業丙酮:上海溶劑廠；
鄰苯三酚，分析純:貴州遵義化工廠；
六、SOD承銷單位:
(1)河南省鄭州市鄭州南陽路14號郵編:450053河南科技報91 10 10月3日。
(2)四川省金堂縣工藝制品技校生化系接待室:金堂寇準政府辦公樓1樓，郵編:610404聯系人:鄧勇栗鵬四川農村報91 3月1。
(3)廣東省深圳市上步區科技學院14號郵政編碼:518031聯系人:黃秋林科技報1992年7月10，
註:1，數據所附產品銷售地址信息均為近兩年報刊摘錄的各單位廣告，並註明出處。
2.妳先看完資料後，可以根據自己的實際情況進行少量實驗，提前聯系產品的采購單位，獲得經驗後再進行批量生產。
3.聯系購買單位時，讀者必須提前聯系，並附上郵費。得到明確答案後，他們會根據情況去找那個人。不要急於避免不必要的經濟負擔。
4.原料和儀器由各地的原料店供應，如廣州的人民南路、上九路等。
附件:詳細的草皮采集信息
廣西南寧生化制藥廠1
地址:魯班路1號
2.上海生化制藥廠
地址:海珠路513號
3.江蘇省徐州生化制藥廠
地址:海培路86號
4.山東省兗州市生化制藥廠
地址:肉聯廠內
5.湖南常德生化制藥廠
地址:肉聯廠內
6.佛山生化制藥廠
地址:佛山
7.廣州明星制藥廠
地址:廣州市河南路葉公大道北48號
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地址:廣州越秀公園乘坐21路公交車，在三元裏北展下車，沿礦泉山莊步行200米。
9.哈爾濱生化制藥廠哈爾濱肉聯廠
地址:哈爾濱路外南集街12號；電話:88423至制藥廠
10，沈陽生化制藥廠
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地址:江蘇省南京市下關區寶塔橋附近；
12，浙江金華生化制藥廠
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13，廣東生物制藥廠
地址:廣州三元裏
廣東省汕頭生化制藥廠14
地址:虎山路西巷2號、3號；電話:666124
江蘇省南京生物制藥廠11
地址:江蘇省南京市下關區寶塔橋附近
12，浙江金華生化制藥廠
地址:浙江省金華市河畔橋路51號。
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地址:廣州三元裏
廣東省汕頭生化制藥廠14
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16.北京利源日用化工廠
17.南京化妝品廠
18.上海第二日用化學品廠
19廣州美容化妝品廠
20南京第二醫藥化學制藥廠
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註:各大藥廠、化妝品廠、美容院都是銷售對象。
聯系電話:010-68150495，68212139。
傳真:010-68212015
地址:北京市石景山區吳家村華電集團大廈三樓
通訊:北京市石景山區40-021信箱
郵政編碼:100040